LC/MS/MS 短链脂肪酸分析方法包
For LabSolutions™ LCMS Software
靶向分析短链脂肪酸和有机酸分析
肠道菌群产生的短链脂肪酸中，乙酸，丙酸和丁酸是众所周知的。研究表明，它们与生活方式有关的疾病（例如肥胖症和糖尿病）之间存在某些联系。一般而言，短链脂肪酸是高挥发性和高亲水性的。这使得难以使用常规的反相色谱系统进行LC/MS分析。因此，该方法包以使用3-硝基苯肼（3-NPH）衍生的短链脂肪酸（C2至C5）为目标。在设定MRM离子对后，该方法包可用于同时分析22种目标化合物，包括与中心代谢途径有关的有机酸。
|
|
MRM离子对设置
设置MRM离子对时，可以通过指定3-硝基苯肼衍生物的特征产物离子来提高选择性。 某些有机酸具有衍生自酮的羰基，因此与羧酸和羰基反应的3-硝基苯肼衍生物被用作MRM离子对的目标。
包括衍生化在内的样品前处理方法
使用说明书中包含了样品前处理所需的整个操作规程，包括使用3-硝基苯肼的衍生化步骤。 通过遵循这些规程，分析人员能够顺利完成从衍生化到数据获取和数据分析的整个过程。为了使用3-硝基苯肼（3-NPH）进行衍生化，碳二亚胺被用作缩合剂，并在温和的条件下进行反应。
此外，为了有效地与短链脂肪酸和有机酸进行反应，该方法包使用3-NPH而不是更常用的2-NPH进行衍生化。反应后的3-NPH衍生产物稳定，因此可以通过与适量的衍生化试剂反应来对样品中的短链脂肪酸或有机酸进行定量分析。 另外，由于使用该衍生试剂在水溶液中发生反应，因此样品不会干燥，挥发性成分也不会丢失。
3-硝基苯肼（3-NPH）衍生化反应
以下示例显示了通过LCMS-8060对短链脂肪酸和有机酸的标准混合溶液进行分析，使用3-NPH衍生的短链脂肪酸和有机酸的MRM色谱图。 可以看出，各目标组分分离度良好，例如结构异构体丁酸和异丁酸，富马酸和马来酸，柠檬酸和异柠檬酸等。
该方法包包括预先设置的MRM离子对，对短链脂肪酸和有机酸的3-NPH衍生化产物分析条件进行了优化。 因而，可以同时分析代表中心代谢途径的短链脂肪酸（C2至C5）和有机酸，而传统的反相色谱系统很难进行同时分析。
