破局者：单杆液质开辟遗传毒性杂质分析新路径

自2000年起，包括奈非那韦事件、缬沙坦事件等多起因遗传毒性杂质而引发的全球性重大药品安全事件，持续促进制药行业对于遗传毒性杂质及其控制策略的关注与研究。2023年4月ICH M7（R2）指导原则正式进入Step 5（即实施阶段）后，业内对于遗传毒性杂质的风险评估、控制策略以及分析方法开发等方面的研究更为深入和全面。其中，亚硝胺类遗传毒性杂质是业内关注度较高且研究较为集中的一类遗传毒性杂质，包括小分子亚硝胺杂质和与原料药相关的亚硝胺类杂质（即NDSRI）。2020年USP已发布亚硝胺杂质相关指导原则即<1469>，2023年FDA发布关于《亚硝胺原料药相关杂质（NDSRI）推荐可接受摄入量限量》工业指南，根据预测的致癌效力分类为NDSRI的AI限值的建议，2024年9月发布《控制人用药物中亚硝胺杂质》最终指南，向行业提供控制亚硝胺的缓解策略及其实施建议。截止到2026年2月26日，USP已发布122种药物中亚硝胺类化合物的标准物质清单。

由于遗传毒性杂质种类繁多，差异性较大，虽然近些年研究较多，但是仍有很多遗传毒性杂质缺乏完整的安全性数据，如NDSRI，与对应API密切相关，对确定其药品中的可接受水平极具挑战。不同AI限值的杂质本身在对应的控制策略和相关分析方法的开发方面存在较大差异，因此，往往需要根据化合物性质和限度要求选择合适、灵敏度优异且稳定性高的分析技术。

对于难挥发性类遗传毒性杂质往往采用液质联用技术进行微量和痕量分析，包括单杆液质联用、三重四极杆液质联用和高分辨液质联用等。

岛津应用团队近些年开发了基于岛津LCMS-TQ RX系列（QqQ）、LCMS-9050（Q-TOF）液质联用仪探究各类药品中遗传毒性杂质的分析方法。考虑到实验室实际分析成本，岛津还使用新一代单杆液质联用仪LCMS-2050开发了磺酸酯类、苯胺类、NDSRIs等分析方法，为制药客户提供分析新路径。

LCMS-2050

LCMS-2050是岛津全新一代小型化液质联用仪，能灵活与岛津多款LC产品进行无缝融合，标配复合型离子源（DUIS）同时支持ESI（电喷雾电离）和APCI（大气压化学电离）两种电离方式，无需更换硬件即可根据样品极性特点选择合适的离子化方式，显著提升方法开发的灵活性和样品分析覆盖能力。此外，通过采用加热型离子源技术，进一步提升脱溶剂效果和离子化效率，有效增强检测灵敏度。

典型应用1——检测某制剂中的4-氯苯胺

>>依次对流动相组成和梯度时间程序进行优化，优选的乙酸流动相体系以及缓和梯度时间程序，实现了主成分等与目标杂质的良好分离。设置阀切换程序将2.3min以后洗脱液切入质谱进行分析，其余时间切入废液，避免高浓度API组分和辅料均进入质谱中造成污染。

图1：样品PDA色谱图（上）和4-氯苯胺SIM谱图（下）

图2：线性考察（左）和残留考察溶剂空白样品（右）

>>连续进样6针，三个浓度（2/20/200ug/L）标准品的保留时间和峰面积的RSD分别为0.05~0.07%和0.37~1.26%，加标回收率93.1~97.4%，精密度和准确度较好。该方法前处理简单，线性范围广（1-500ug/L），灵敏度高，可作为推荐。

典型应用2 检测盐酸奈必洛尔中的N-亚硝基-奈必洛尔杂质

>>制备浓度为1、5、10、50、100和180 ng/mL的标准工作溶液。在优化的色谱条件下，奈必洛尔和N-亚硝基奈必洛尔的保留时间分别为1.952分钟和3.408分钟，因此质谱数据采集在2.8分钟后开始，从而实现对目标杂质的选择性检测。这一方法有效地实现了痕量杂质的准确且无干扰分析。

图3：PDA色谱图（左），空白和标准溶液的SIM色谱图（右）A、500 μg/mL奈必洛尔；B、16 μg/mL N-亚硝基-奈必洛尔；C、5ng/ml标准溶液；D、空白

图4：质谱条件和阀切时间（左）校正曲线（右）

>>在1~180ng/mL的浓度范围内，N-亚硝基奈必洛尔的相关系数为0.9999。当加入浓度分别为0.03 μg/mg和0.3 μg/mg时，N-亚硝基奈必洛尔的回收率分别为100.4%和100.2%，回收率良好。该方法可为奈必洛尔药物原料中亚硝胺杂质N-亚硝基奈必洛尔的检测提供技术参考。

岛津公司为药检机构、制药企业、研发机构、CRO/CDMO等提供完善的遗传毒性杂质检测方案，不限于沙坦类药物、替丁类药物、二甲双胍、磺酸盐类药物等。特别是针对当前业内热点关注的NDSRIs的分析方法建立与检测，岛津公司应用团队携全系列质谱产品可全程为制药客户提供技术及服务支持。

LCMS-9050高分辨液质联用仪

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