Prominence nano

纳升液相色谱仪

 

高保留时间重复性

蛋白质组分析需要比较不同样本的色谱峰差异,而样本中又存在许多特征相似的多肽,对保留时间的重复性要求非常高。Prominence nano系统的高重复性可保证蛋白质组分析的高精数据,配置了RFC系统的LC-20AD nano可以在流速为300 nL/min获得RSD不超过0.2% 的保留时间重复性。


牛血清白蛋白(BSA)酶解样品的重复性

2维 LC的高分辨率


牛血清白蛋白(BSA)酶解样品的重复性

在蛋白质组学分析时,单一的1D反相分离不足以提供足够的色谱峰容量;所以,为了实现复杂样品的分离,需要进行2D分离以保证足够的峰容量。Prominence nano系统可以进行2D分析,结合阳离子交换和反相模式,为蛋白质组学分析提供所需的核心技术。下图为200fmol酵母蛋白质的分析图,1D分离中的未分离组分在2D中继续分离成几个组分,2D分离的峰容量大大大于1D所获得的效果。

分析条件

一维

PolysulfoethylA (50mmL.×1mmI.D.)

流动相

甲酸铵缓冲液
浓度STEP梯度

流速

 40 nL/min

捕集柱

(5 mmL.×300 m I.D.)
L-column (micro)

捕集时长

5分钟

脱盐溶剂

水/蚁酸=100/0.1

脱盐流速

L/min

脱盐时长

5分钟

2维

PicoFrit (100 mmL.×75 m I.D.)

流动相

梯度洗脱
A)水/乙腈/蚁酸=98/2/0.1(v/v)  B) 水/乙腈/蚁酸=5/95/0.1(v/v)

流速

600nL/min

温度

温度

检测

LCMS-IT-TOF

样本

酵母蛋白中的蛋白
(相当于200 fmol的)

* 分别利用1维和2维中不同类型的柱体进行其他组合的分离模式也是可行的。在这种情况下,分离或检测方法由于使用的移动相分离模式或类型之间的相互作用,可能会有一些限制。

连接MALDI-TOFMS使用

Prominence nano系统不仅仅可以通过nano ESI接口连接LCMS使用,还可连接到配有自动点靶仪的MALDI-TOFMS仪器。为了准确分析MALDI靶的每个色谱峰,需要LC能够在1nL到1µL范围之内更准确地控制流速,Prominence nano系统能够满足此需要。


酶解BSA样品的UV色谱图(500fmol)

分析条件

检测器

UV220 nm

MonoCap for Fast-flow 快速MonoCap
 (250 mmL. × 100 µm I.D.)

流动相

1、水/乙腈/蚁酸=98/2/0.1(v/v)  B) 水/乙腈/蚁酸=5/95/0.1(v/v)
2、梯度洗脱

流速

1 µL/min

温度

环境温度

捕捉柱

ODS (1 mmL. × 0.5 mm I.D.)

点靶间隔

12 秒的点断
每点液体:200nL(不包括基质)

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